Requisitos para el registro de esporicidas

Los esporicidas se utilizan en superficies y objetos duros, no porosos e inanimados para eliminar las esporas. Las esporas bacterianas se consideran la forma de vida microbiana más difícil de destruir.

La EPA de EE. UU. requiere la generación de datos de eficacia bajo condiciones de prueba controladas para poder indicar que los productos antimicrobianos son esporicidas. Para generar datos de eficacia esporicida, se debe seguir el método oficial de la AOAC 966.04 Actividad esporicida de los desinfectantes. Agregar atributos esporicidas de superficie dura y no porosa a un producto líquido implica exponer 60 portadores de penicilindros de acero inoxidable inoculados con esporas de Bacillus subtilis (ATCC 19659) y Clostridium sporogenes (ATCC 3584) al esporicida. Deben analizarse tres lotes del producto en el LCL de las AI enumeradas en el CSF para el producto. Además de este requisito, un esporicida también debe demostrar la ausencia de crecimiento (eliminación completa) en 60 portadores (30 portadores por organismo para un lote) en una prueba de verificación. Las pruebas de verificación se deben hacer en un laboratorio separado o con un nuevo grupo de personal.

En Europa, los fabricantes realizan pruebas de suspensión de acuerdo con el método EN 13704 para afirmar la actividad esporicida. Para hacer una afirmación esporicida, se debe lograr una reducción logarítmica >3 de Bacillus subtilis (ATCC 6633) con un tiempo de contacto menor o igual a 60 minutos.

La versión más actualizada de EN13704 en 2018 se emitió con una serie de cambios con respecto a la versión anterior publicada en 2002, incluidos cambios en la preparación de esporas y controles de susceptibilidad de los organismos de prueba. 

La preparación de esporas de EN13704 exige que el 80 % de las células vegetativas produzca esporas, y AOAC 966.04 requiere que el 95 % de las células vegetativas produzca esporas.  Una vez que se produce la suspensión de esporas, EN13704 exige una prueba de susceptibilidad para comparar el rendimiento de la suspensión de esporas frente a dos biocidas estándar, glutaraldehído y ácido peracético. Las pruebas utilizan dos niveles por biocida: concentraciones altas y bajas. Para cumplir con los criterios de aceptación de EN13704, la suspensión de esporas debe demostrar supervivencia (reducción logarítmica <3) en la concentración baja y eliminación (reducción logarítmica >3) en la concentración alta. AOAC 966.04 requiere una prueba de resistencia al ácido clorhídrico para comparar el rendimiento de la suspensión de esporas frente a un estándar de 2.5 M HCl. Para cumplir con los criterios de aceptación de la AOAC 966.04, las esporas deben resistir 2.5 M HCl durante un total superior o igual a los 2 minutos.

El uso de suspensiones de esporas en la prueba esporicida de la AOAC, y la preparación y uso cuidadosos de las suspensiones de esporas en EN13704 asegura que a los productos que afirman ser esporicidas se los desafíe adecuadamente durante las pruebas de eficacia.

Eficacia esporicida del compuesto de amonio cuaternario

Los compuestos de amonio cuaternario (QAC) son agentes tensioactivos catiónicos y tienen una amplia gama de actividad contra los microorganismos, aunque por lo general son más efectivos contra las bacterias grampositivas en concentraciones más bajas que las bacterias gramnegativas. Son considerablemente menos efectivos contra los formadores de esporas³. 

Muchos biocidas son bactericidas o bacteristáticos a bajas concentraciones para bacterias que no producen esporas, incluidas las células vegetativas de las especies de Bacillus y Clostridium. Las concentraciones elevadas de algunos biocidas pueden lograr una eficacia esporicida (por ejemplo, para el glutaraldehído y los agentes que liberan cloro). 

Por el contrario, incluso las altas concentraciones de alcohol, fenólicos, QAC y clorhexidina carecen de efecto esporicida (aunque la clorhexidina puede tener eficacia esporicida cuando se usa a temperaturas elevadas)⁴. 

Los QAC son esporostáticos; inhiben el crecimiento de esporas (el desarrollo de una célula vegetativa a partir de una espora germinada), pero no los procesos de germinación reales (desarrollo desde la inactividad hasta un estado metabólicamente activo)².

Es probable que los QAC muestren cierto grado de eficacia contra las células vegetativas de las especies de Bacillus y Clostridium; sin embargo, los QAC no son capaces de destruir la espora en sí.

Las atribuciones esporicidas requieren que se realicen pruebas contra esporas, no contra células vegetativas. Para mantener el control dentro del entorno de la sala blanca, se deben emplear agentes biocidas con actividad esporicida contra las propias esporas.

[1] McDonnell, G, Russell AD. Antiseptic and Disinfectant: Activity, Action and Resistance [Antiséptico y desinfectante: actividad, acción y resistencia]. Microbiol. Clín. Enero de 1999; 12(1):147-179.
[2] Russell AD. Bacterial spores and chemical sporicidal agents [Esporas bacterianas y agentes esporicidas químicos]. Rev. de Microbiol. Clín. Abril de 1990; 3(2):99-119.
[3] Sandle, T. The CDC Handbook: A Guide to Cleaning & Disinfecting Cleanrooms [El manual del CDC: Una guía para limpiar y desinfectar slas blancas]. 1-27.
[4] Shaker L A, Russell A D, Furr J R. Aspects of the action of chlorhexidine on bacterial spores [Aspectos de la acción de la clorhexidina en esporas bacterianas]. Int. Journal of Pharm. 1986;34:51-56.